Referência Fluorescente para Vesículas Extracelulares
O Vesi-Ref CD63-mNG é um material de referência fluorescente para vesículas extracelulares, desenvolvido para apoiar a caracterização, validação e controle de ensaios envolvendo EVs, exossomos e nanopartículas biológicas.
O produto é composto por um isolado de vesículas extracelulares derivado de células HEK 293 modificadas para expressar a proteína fluorescente mNeonGreen associada à tetraspanina CD63, um dos marcadores mais utilizados em estudos de vesículas extracelulares.
Por combinar propriedades físicas de EVs com sinal fluorescente intraluminal, o Vesi-Ref CD63-mNG pode ser utilizado como referência em métodos ortogonais de caracterização, controle de sensibilidade, comparação entre plataformas e avaliação da reprodutibilidade em análises de vesículas extracelulares.
Material de referência fluorescente para EVs e exossomos
A caracterização de vesículas extracelulares é uma etapa essencial para confirmar a presença de EVs, estimar sua quantidade e avaliar a contribuição de componentes não vesiculares em uma preparação.
Esse processo pode ser desafiador devido ao pequeno tamanho das EVs, à heterogeneidade de tamanho e composição, à ausência de métodos universais de identificação e à limitação de muitas técnicas analíticas quando utilizadas de forma isolada.
Por isso, recomenda-se o uso de métodos ortogonais, ou seja, técnicas com princípios de medição diferentes e limitações distintas. O Vesi-Ref CD63-mNG foi desenvolvido justamente para apoiar esse tipo de abordagem, oferecendo um material de referência com características compatíveis com vesículas extracelulares reais.
Fluorescência mNeonGreen associada ao CD63
O Vesi-Ref CD63-mNG expressa mNeonGreen, uma proteína fluorescente com máximo de excitação em 506 nm e máximo de emissão em 517 nm, compatível com a maioria dos conjuntos de filtros GFP/FITC.
Segundo o material do fabricante, a mNeonGreen apresenta sinal fluorescente mais brilhante do que GFP e maior estabilidade frente ao fotobranqueamento induzido por laser em comparação ao EGFP.
Essa fluorescência torna o Vesi-Ref CD63-mNG especialmente útil em aplicações que dependem de detecção sensível, como citometria de fluxo, microscopia confocal, microscopia de super-resolução, F-NTA, SP-IRIS, F-MRPS, ELISA e outras plataformas equipadas com configuração adequada de laser e detector.
Propriedades e fluorescência por Single EV Imaging Flow Cytometry
A avaliação do Vesi-Ref CD63-mNG pode ser realizada por Single EV Imaging Flow Cytometry, permitindo analisar propriedades de vesículas extracelulares individuais e seu sinal fluorescente.
O gráfico demonstra a diferença entre o tampão controle e o Vesi-Ref CD63-mNG, evidenciando a presença de eventos positivos para mNeonGreen em uma população de vesículas extracelulares fluorescentes.
Esse tipo de análise permite verificar a fluorescência associada às EVs e apoiar o controle de desempenho em ensaios que dependem de detecção fluorescente em partículas individuais.
Material estável para estudos comparativos e multilaboratoriais
A estabilidade de longo prazo é uma característica importante em materiais de referência, pois permite que suas propriedades físicas e químicas sejam utilizadas de forma confiável em diferentes experimentos.
O Vesi-Ref CD63-mNG é estabilizado em Vesi-Safe, tampão desenvolvido para preservação e armazenamento de vesículas extracelulares. Com isso, o material pode ser armazenado por períodos prolongados em temperaturas entre -80°C e -20°C, além de manter estabilidade durante condições operacionais de análise, conforme o fluxo de trabalho utilizado.
O produto também pode ser aliquotado no recebimento e transportado até o ponto de uso, o que é especialmente útil em estudos multilaboratoriais que exigem uma referência única para comparação entre diferentes locais, instrumentos e operadores.
Distribuição de tamanho por NTA com ZetaView e NanoSight
O Vesi-Ref CD63-mNG pode ser avaliado por Nanoparticle Tracking Analysis, ou NTA, para estimar a distribuição de tamanho baseada em número de partículas.
Os dados apresentados pelo fabricante incluem medições realizadas com ZetaView Nanoparticle Tracking Profiler e NanoSight 500, demonstrando a aplicação do Vesi-Ref CD63-mNG em plataformas de rastreamento de nanopartículas.
Esse tipo de avaliação permite comparar informações de tamanho e concentração entre diferentes métodos, contribuindo para uma caracterização mais robusta das vesículas extracelulares.
Controle positivo para ligação anti-CD63-APC
Além da fluorescência intrínseca por mNeonGreen, o Vesi-Ref CD63-mNG pode ser utilizado como controle positivo para ligação de anticorpos direcionados ao marcador CD63.
No ensaio apresentado pelo fabricante, amostras de tampão ou EVs foram coradas com anti-human-CD63-APC e analisadas por Single EV Imaging Flow Cytometry. A comparação entre tampão controle, amostras não coradas, controle isotípico e marcação com anti-CD63-APC permite avaliar a fluorescência, a presença de CD63 e a funcionalidade de ligação do anticorpo.
Essa aplicação é útil para ensaios de imunofenotipagem, validação de anticorpos, controle de marcação e desenvolvimento de métodos envolvendo vesículas extracelulares positivas para CD63.
Caracterização ortogonal de EVs alinhada às recomendações MISEV2023
A caracterização de vesículas extracelulares não deve depender de uma única técnica. Como EVs são partículas pequenas, heterogêneas e complexas, diferentes métodos podem gerar respostas complementares sobre tamanho, concentração, presença de marcadores, fluorescência e composição da amostra.
O Vesi-Ref CD63-mNG foi desenvolvido para apoiar a validação de medições obtidas por métodos ortogonais, fornecendo um material de referência com características físico-químicas próximas às vesículas extracelulares estudadas.
Por ser um isolado de EVs, o material pode ser utilizado como referência em técnicas que exigem compatibilidade de densidade, distribuição de tamanho e composição geral de lipídios, ácidos nucleicos e proteínas. A presença da fluorescência mNeonGreen adiciona uma dimensão extra de detecção, permitindo uso em plataformas com laser e detector compatíveis.
Controles com detergente para validação de especificidade
Controles com detergente podem ser utilizados para avaliar a especificidade de eventos associados a vesículas extracelulares, uma vez que a ruptura da membrana pode reduzir ou eliminar sinais relacionados à integridade das EVs.
No exemplo apresentado, a comparação entre amostra sem tratamento e amostra tratada com detergente ajuda a demonstrar a especificidade da detecção de eventos relacionados ao Vesi-Ref CD63-mNG.
Esse tipo de controle é relevante para diferenciar sinais associados a EVs intactas de possíveis eventos inespecíficos, agregados ou interferências analíticas.
Aplicação em Nano-Flow Cytometry
O Vesi-Ref CD63-mNG também pode ser aplicado em análises por Nano-Flow Cytometry, permitindo avaliar partículas fluorescentes em instrumentos dedicados à detecção de nanopartículas.
A análise por nano-citometria de fluxo contribui para a avaliação de populações positivas para mNeonGreen e CD63, podendo ser utilizada em estudos de caracterização, controle de ensaio e comparação entre métodos.
Aplicações do Vesi-Ref CD63-mNG
O Vesi-Ref CD63-mNG pode ser integrado a diferentes fluxos de trabalho envolvendo caracterização, validação e controle de qualidade em estudos com vesículas extracelulares.
Aplicações principais:
- Material de referência fluorescente para EVs
- Controle positivo em ensaios com CD63
- Validação de métodos para vesículas extracelulares
- Comparação entre plataformas analíticas
- Controle de sensibilidade e limite de detecção
- Single EV Imaging Flow Cytometry
- Citometria de fluxo e FACS
- Nano-Flow Cytometry
- NTA e F-NTA
- SP-IRIS
- F-MRPS
- Microscopia confocal
- Microscopia de super-resolução
- ELISA e ensaios baseados em captura
- Estudos multilaboratoriais com referência comum
Especificações técnicas do Vesi-Ref CD63-mNG
```html| Especificação | Vesi-Ref CD63-mNG |
|---|---|
| Tipo de produto | Material de referência fluorescente para vesículas extracelulares |
| Origem | Isolado de EVs derivado de células HEK 293 |
| Marcador associado | CD63 |
| Proteína fluorescente | mNeonGreen |
| Excitação mNeonGreen | 506 nm |
| Emissão mNeonGreen | 517 nm |
| Concentração mNG+ | 1.32E10 partículas/mL |
| MFI para amostras não coradas | 786.6309 FITC MESF |
| Estimativa de EVs modificadas | 88.90% |
| Diâmetro modal por NTA NanoSight | 138.6 nm |
| Diâmetro modal por NTA ZetaView | 122.6 nm |
| Volume | 100 µL |
| Tampão | Vesi-Safe |
| Armazenamento | -80°C a -20°C |
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Perguntas frequentes sobre o Vesi-Ref CD63-mNG
O que é o Vesi-Ref CD63-mNG?
O Vesi-Ref CD63-mNG é um material de referência fluorescente para vesículas extracelulares, derivado de células HEK 293 modificadas para expressar mNeonGreen associada ao marcador CD63.
Para que serve o Vesi-Ref CD63-mNG?
O produto serve como referência para caracterização, validação, controle de sensibilidade, comparação entre métodos e avaliação de reprodutibilidade em ensaios com vesículas extracelulares.
O Vesi-Ref CD63-mNG é um exossomo?
O Vesi-Ref CD63-mNG é um isolado de vesículas extracelulares utilizado como material de referência. Ele pode ser aplicado em estudos envolvendo EVs e exossomos, especialmente quando é necessário um controle fluorescente positivo.
Qual proteína fluorescente é usada no Vesi-Ref CD63-mNG?
O material utiliza mNeonGreen, proteína fluorescente com excitação máxima em 506 nm e emissão máxima em 517 nm.
O Vesi-Ref CD63-mNG é compatível com filtros GFP/FITC?
Sim. A fluorescência da mNeonGreen é compatível com a maioria dos conjuntos de filtros GFP/FITC.
O Vesi-Ref CD63-mNG pode ser usado em citometria de fluxo?
Sim. O material pode ser utilizado em citometria de fluxo, Single EV Imaging Flow Cytometry, FACS e Nano-Flow Cytometry, desde que o instrumento possua configuração adequada de laser e detector.
O Vesi-Ref CD63-mNG pode ser usado em NTA ou F-NTA?
Sim. O Vesi-Ref CD63-mNG pode ser avaliado por NTA e F-NTA, incluindo plataformas como ZetaView e NanoSight.
Qual marcador de EV está presente no Vesi-Ref CD63-mNG?
O material é associado ao marcador CD63, uma tetraspanina amplamente utilizada em estudos de vesículas extracelulares.
O Vesi-Ref CD63-mNG pode ser usado como controle positivo para anti-CD63?
Sim. O produto pode ser utilizado como controle positivo em ensaios de ligação com anticorpos anti-CD63, como anti-CD63-APC.
Como o Vesi-Ref CD63-mNG deve ser armazenado?
O material é estabilizado em Vesi-Safe e pode ser armazenado entre -80°C e -20°C, conforme as orientações do fabricante.
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