Este artigo é baseado em um estudo da Particle Metrix , que foca na análise de vesículas extracelulares (EVs) derivadas de células-tronco mesenquimais, com o uso do sistema ZetaView . O estudo foi realizado para investigar a composição dessas vesículas, marcadas com fluorescência, e analisadas por meio da Análise de Rastreio de Nanopartículas com Colocalização (C-NTA) . O ZetaView , uma ferramenta de ponta, foi utilizado para detectar e quantificar as EVs, além de permitir a rastreabilidade de múltiplos marcadores fluorescentes simultaneamente.
Os dados técnicos do estudo mostraram que a análise com ZetaView permitiu detectar EVs com um diâmetro médio de 117 nanômetros e uma concentração de 2,5 × 10¹¹ partículas por mililitro , o que abre novas possibilidades para aplicações terapêuticas e diagnósticas.
O Que São Vesículas Extracelulares (EVs)?
As EVs são pequenas partículas secretadas pelas células, envoltas por uma membrana lipídica , que transportam sinais moleculares de uma célula para outra, podendo influenciar o comportamento celular. Por isso, elas têm grande potencial para serem usadas tanto em diagnósticos quanto em terapias. Por exemplo, EVs podem carregar moléculas bioativas que ajudam a regenerar tecidos danificados ou a tratar doenças crônicas.
O Que é a Análise de Rastreio de Nanopartículas (NTA)?
A Análise de Rastreio de Nanopartículas , ou NTA, é uma técnica que mede o tamanho e a concentração de nanopartículas, como as EVs, em uma amostra. Com a ajuda do sistema ZetaView , é possível analisar de maneira precisa e simultânea múltiplos marcadores fluorescentes em EVs, permitindo identificar e quantificar essas partículas, especialmente aquelas menores que 200 nanômetros.
Essa técnica é vital porque as EVs transportam informações cruciais sobre o estado da célula de origem, o que pode ser utilizado em diversas áreas da medicina, como no tratamento de doenças neurodegenerativas e na detecção precoce de câncer.
Como o ZetaView Foi Usado?
O ZetaView é um sistema altamente preciso para análise de partículas, utilizado neste estudo para detectar e quantificar EVs derivadas de células-tronco mesenquimais. Para isso, as EVs foram marcadas com fluoróforos (substâncias que emitem luz quando expostas à radiação) e analisadas por meio de colocalização com marcadores fluorescentes específicos, como CD9 , CD41 e CMDR .
- CD9 e CD41 são proteínas associadas a vesículas.
- CMDR é um corante fluorescente que marca partículas lipídicas, independentemente do conteúdo proteico.
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Além disso, o controle FMO (Fluorescence Minus One) foi utilizado para garantir que as medições fossem precisas e sem sobreposição de fluorescência.
Para avaliar ainda mais a colocalização dos marcadores fluorescentes nas EVs, foram geradas representações gráficas das coordenadas do centróide dos eventos de espalhamento
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Parâmetros de Medição no Modelo PMX-430 QUATT ZetaView®
A análise das EVs utilizando o ZetaView se baseou em parâmetros específicos para a medição de colocalização dos fluoróforos. Abaixo, estão os detalhes dos parâmetros de medição usados para cada marcador fluorescente:
| Parâmetros de Medição | Modo Fluorescência para anti-CD9 | Modo Fluorescência para anti-CD41 | Modo Fluorescência para CellMask™M Deep Red |
|---|---|---|---|
| Fonte de Fluorescência | Pacific Blue (2=405F410nm) | AF488 (1=488F500nm) | Deep Red (7=640F660nm) |
| Posições | 3 | 1 | 3 |
| Número de Ciclos | 1 | 1 | 1 |
| Sensibilidade | 50 | 90 | 50 |
| Chutor | 100 | 200 | 100 |
| Tracelength | 12 | 12 | 12 |
| MinArea | 1000 | 1000 | 1000 |
| MaxArea | 1000 | 1000 | 1000 |
| MinSize | 1 | 1 | 1 |
| MaxSize | 1000 | 1000 | 1000 |
| Framerate | 30 fos | 30 fos | 30 fos |
| Link Radius | 15 | 15 | 15 |
| Switch Frame | 10 | 10 | 10 |
| Laser off Frames | 5 | 5 | 5 |
| Max Skip | 1 | 1 | 1 |
Após a medição dos parâmetros de colocalização, os resultados foram analisados com o uso de tratamento para disruptura das partículas membranosas. A Entenda como a análise de EVs com ZetaView® pode impulsionar a medicina personalizada. Leia o artigo completo e descubra a inovação tecnológica! baixo está a distribuição do tamanho das EVs multimarcardas após o tratamento com 0,5% NP-40, que foi utilizado para a disruptura das membranas das partículas:
Distribuição do tamanho das EVs multimarcardas após tratamento com 0,5% NP-40 para disruptura de partículas membranosas.
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Essa análise é fundamental para entender como as partículas se comportam sob diferentes condições experimentais, ajudando a validar os parâmetros de medição utilizados na pesquisa.
Resultados e Conclusões do Estudo
Os resultados mostraram que, com o uso do ZetaView® , foi possível detectar EVs positivas para os marcadores CD9 , CD41 e CMDR , com um diâmetro médio de 117 nanômetros e uma concentração de 2,5 × 10¹¹ partículas por mililitro . Esses dados são importantes porque permitem a caracterização detalhada de EVs, fundamental para tratamentos terapêuticos e diagnósticos mais eficazes.
Impactos e Benefícios para Terapias Celulares e Diagnóstico
1. Terapia Celular:
As vesículas extracelulares estão sendo usadas em terapias celulares para tratar doenças como o Alzheimer. Nesse caso, EVs derivadas de células-tronco mesenquimais possuem propriedades que podem ajudar a reduzir a inflamação e proteger os neurônios. A análise precisa dessas EVs ajuda a identificar as populações mais eficazes para tratar doenças neurodegenerativas, tornando o tratamento mais eficaz e direcionado.
2. Diagnóstico de Câncer:
No diagnóstico, as EVs podem ser usadas como biomarcadores para detectar câncer de forma precoce. As EVs presentes no sangue de pacientes com câncer carregam informações sobre o tumor, o que pode ajudar a identificar o tipo e a gravidade da doença. A análise de marcadores fluorescentes como CD9/CD41 e CD9/CMDR pode melhorar a precisão do diagnóstico, tornando a detecção de câncer mais eficiente.
Como Isso Impacta a Medicina Personalizada?
A análise de EVs por meio de tecnologias avançadas como a Análise de Rastreio de Nanopartículas com Colocalização pode transformar a medicina personalizada. Essa técnica permite a segmentação de populações de EVs específicas para tratamentos de doenças como o câncer ou doenças neurodegenerativas. Com essa abordagem, é possível escolher as EVs mais eficazes para cada paciente, otimizando terapias e garantindo melhores resultados.
Conclusão
Este estudo e o uso do sistema ZetaView® são fundamentais para o avanço da biotecnologia, proporcionando uma análise precisa de vesículas extracelulares . Essa técnica tem um enorme potencial para melhorar terapias celulares e diagnósticos , trazendo benefícios diretos para áreas como o tratamento de doenças neurodegenerativas, como o Alzheimer, e a detecção precoce de câncer . Além disso, com a precisão do ZetaView®, a medicina personalizada ganha uma nova ferramenta para oferecer tratamentos mais eficazes, baseados nas características moleculares e celulares de cada paciente.
Se você está interessado em mais informações sobre como a análise de EVs pode revolucionar o tratamento e diagnóstico de doenças, leia a nota de aplicação completa clicando aqui !
FAQ - Análise de Vesículas Extracelulares (EVs) com o Sistema ZetaView®
1. O que são Vesículas Extracelulares (EVs)?
As Vesículas Extracelulares (EVs) são pequenas partículas secretadas pelas células, envoltas por uma membrana lipídica. Elas desempenham um papel importante no transporte de sinais moleculares entre as células e têm grande potencial para aplicações terapêuticas e diagnósticas, como no tratamento de doenças crônicas e na regeneração de tecidos danificados.
2. Como o ZetaView® é utilizado para análise de EVs?
O ZetaView® é um sistema avançado para a análise de partículas, que permite a detecção, quantificação e análise de EVs. Ele utiliza a técnica de Análise de Rastreio de Nanopartículas (NTA) para medir o tamanho e a concentração das EVs, além de permitir a rastreabilidade simultânea de múltiplos marcadores fluorescentes.
3. Qual a importância da colocalização de marcadores fluorescentes em EVs?
A colocalização de marcadores fluorescentes, como CD9, CD41 e CMDR, é crucial para identificar e quantificar as populações de EVs. Esse processo permite detectar EVs específicas com base nas características de fluorescência, ajudando na análise detalhada da composição e tamanho das partículas.
4. Quais são os marcadores fluorescentes utilizados no estudo?
No estudo mencionado, foram usados três marcadores fluorescentes principais:
- Anti-CD9 Pacific Blue
- Anti-CD41 AF488
- CellMask™ Deep Red (CMDR)
Esses marcadores ajudam a identificar as EVs positivas para cada proteína específica, facilitando a análise detalhada.
5. O que é a técnica de NTA (Análise de Rastreio de Nanopartículas)?
A Análise de Rastreio de Nanopartículas (NTA) é uma técnica que mede o tamanho e a concentração de nanopartículas em uma amostra, como as EVs. Com o ZetaView®, é possível realizar essa medição de forma precisa e simultânea para múltiplos marcadores fluorescentes, possibilitando uma caracterização detalhada das EVs.
6. Como o tratamento com NP-40 afeta as EVs?
O tratamento com 0,5% NP-40 foi utilizado para disruptura das membranas das partículas, facilitando a análise da distribuição do tamanho das EVs após o tratamento. Esse processo é essencial para verificar como as partículas se comportam sob diferentes condições experimentais e validar os parâmetros de medição utilizados no estudo.
7. Quais os resultados obtidos no estudo com o ZetaView®?
Os resultados mostraram que, com o ZetaView®, foi possível detectar EVs positivas para os marcadores CD9, CD41 e CMDR, com um diâmetro médio de 117 nanômetros e uma concentração de 2,5 × 10¹¹ partículas por mililitro. Esses dados são importantes para a caracterização detalhada de EVs, fundamentais para terapias e diagnósticos mais eficazes.
8. Como a análise de EVs impacta a medicina personalizada?
A análise precisa das EVs, como a feita com o ZetaView®, permite a segmentação de populações específicas de EVs para tratamentos direcionados. Essa abordagem tem o potencial de transformar a medicina personalizada, otimizando terapias para doenças como câncer e neurodegenerativas, com base nas características moleculares e celulares de cada paciente.
9. Quais os benefícios das EVs para terapias celulares e diagnóstico?
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Terapias Celulares: EVs derivadas de células-tronco mesenquimais possuem propriedades terapêuticas, como redução da inflamação e proteção de neurônios, sendo eficazes no tratamento de doenças neurodegenerativas como Alzheimer.
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Diagnóstico de Câncer: EVs podem atuar como biomarcadores para a detecção precoce de câncer, oferecendo informações cruciais sobre o tumor, ajudando na identificação do tipo e gravidade da doença.
10. Onde posso aprender mais sobre a análise de EVs e seus impactos na medicina?
Para mais informações detalhadas sobre como a análise de EVs pode revolucionar o tratamento e diagnóstico de doenças, você pode acessar a nota de aplicação completa ou entrar em contato com a Dafratec, fornecedora oficial do ZetaView® no Brasil.
