Isolamento de vesículas extracelulares: por que a purificação é tão importante?
O isolamento de vesículas extracelulares (EVs) é uma etapa essencial em pesquisas sobre comunicação celular, biomarcadores e mecanismos de doenças. Entretanto, obter amostras adequadas para análise continua sendo um desafio, especialmente quando as EVs são provenientes de plasma e outros biofluidos.
Essas amostras contêm proteínas, lipoproteínas e partículas não vesiculares que podem interferir na caracterização. Por isso, a escolha do método de purificação influencia diretamente a qualidade dos resultados.
A cromatografia de exclusão por tamanho (SEC) é uma das estratégias utilizadas para separar vesículas extracelulares de componentes menores. Novas abordagens buscam ampliar sua capacidade de processamento e reduzir interferências.
O principal desafio não é apenas recuperar vesículas extracelulares, mas obter preparações compatíveis com as análises científicas pretendidas.
Webinário Vesiculab: isolamento rápido e escalável de EVs por SEC
No dia 28 de outubro de 2026, a Vesiculab realizará o webinário Rethinking SEC: Fast & Scalable EV Isolation From Plasma and Other Biofluids, dedicado às estratégias de isolamento e purificação de vesículas extracelulares.
O encontro será apresentado por Rachel Butler, PhD, gerente científica e técnica da Vesiculab. A pesquisadora possui experiência em cromatografia de exclusão por tamanho, nano-citometria de fluxo e análises proteômicas.
Durante a apresentação, serão abordadas soluções para reduzir contaminantes, otimizar o preparo de amostras e ampliar o processamento paralelo de EVs.
Entre os principais temas estão:
- Vesi-Omics: depleção seletiva de lipoproteínas ApoB+ presentes no plasma.
- Vesi-SEC: purificação de EVs por cromatografia de exclusão por tamanho.
- Vesi-SEC Micro: remoção de corantes e anticorpos livres após a marcação fluorescente.
- Formato de 96 poços: nova abordagem para processamento paralelo de até 96 amostras.
Data: 28 de outubro de 2026, quarta-feira.
Horário informado: 12h às 13h, sujeito à confirmação do fuso horário.
Formato: online, via Microsoft Teams.
Apresentadora: Rachel Butler, PhD.
Participe do webinário gratuito e conheça estratégias para tornar o isolamento de vesículas extracelulares mais prático e escalável. Inscreva-se no webinário Vesiculab.
Quais são os principais desafios do isolamento de EVs do plasma?
O plasma é uma matriz biológica complexa. Além das vesículas extracelulares, contém proteínas solúveis e diferentes classes de lipoproteínas, como HDL, LDL e VLDL.
Parte dessas estruturas apresenta características semelhantes às EVs, incluindo faixas de tamanho que se sobrepõem. Isso dificulta a separação e pode comprometer a interpretação das análises.
Como as partículas contaminantes interferem na caracterização de vesículas extracelulares?
A presença de lipoproteínas, proteínas solúveis e outros componentes não vesiculares pode comprometer diferentes técnicas de caracterização de EVs. O impacto depende do método analítico, da composição da amostra e do nível de purificação necessário.
NTA: interferência de partículas não vesiculares na contagem e caracterização
A análise de rastreamento de nanopartículas (NTA) permite determinar a distribuição de tamanho e a concentração de partículas em suspensão. Entretanto, lipoproteínas, agregados proteicos e outras estruturas não vesiculares podem contribuir para a contagem total, dificultando a interpretação dos resultados em amostras de plasma.
O ZetaView, da Particle Metrix, comercializado pela Dafratec, utiliza a técnica NTA para medir tamanho e concentração de nanopartículas, além de potencial zeta. Suas configurações com fluorescência permitem investigar populações marcadas e realizar análises de colocalização por C-NTA, conforme a versão do equipamento.
A combinação entre purificação por SEC e caracterização por ZetaView permite integrar o preparo de amostras à análise de partículas. A fluorescência também pode acrescentar informações sobre populações específicas, desde que sejam utilizados marcadores e controles adequados.
A purificação por SEC ajuda a reduzir interferentes antes da análise por NTA, enquanto o ZetaView permite avaliar tamanho, concentração e características fluorescentes de nanopartículas.
Conheça o ZetaView na Dafratec
Proteômica: como proteínas plasmáticas contaminam as análises de EVs?
A proteômica permite investigar proteínas associadas às vesículas extracelulares, contribuindo para estudos de biomarcadores, comunicação celular e mecanismos de doenças. Entretanto, o plasma contém proteínas abundantes, como albumina e imunoglobulinas, que podem permanecer nas preparações de EVs.
Essas proteínas podem dominar o sinal analítico em experimentos de espectrometria de massas, dificultando a identificação de componentes menos abundantes. Além disso, lipoproteínas coisoladas podem introduzir proteínas que não pertencem às vesículas estudadas.
Estratégias de purificação por SEC, combinadas à depleção seletiva de lipoproteínas quando necessário, ajudam a reduzir parte dessas interferências e melhorar a adequação das amostras às análises proteômicas.
Na proteômica de EVs, reduzir proteínas plasmáticas e lipoproteínas coisoladas é importante para distinguir componentes associados às vesículas de contaminantes presentes na amostra.
Nano-citometria: interferência de corantes e anticorpos livres na detecção de EVs
A nano-citometria de fluxo permite investigar partículas individuais e detectar sinais associados a marcadores fluorescentes. Essa abordagem é utilizada para estudar características de vesículas extracelulares, incluindo a presença de proteínas de membrana e outras moléculas de interesse.
Entretanto, corantes livres, anticorpos não ligados e agregados fluorescentes podem produzir eventos ou sinais de fundo, dificultando a diferenciação entre partículas marcadas e interferentes.
A remoção desses componentes após a marcação é uma etapa importante no preparo das amostras. Colunas como o Vesi-SEC Micro permitem incorporar uma etapa de limpeza por SEC antes da análise, reduzindo a presença de reagentes livres.
Na nano-citometria de EVs, a limpeza pós-marcação contribui para reduzir sinais de fundo e melhorar a interpretação dos eventos fluorescentes detectados.
Estudos funcionais: como contaminantes podem alterar os resultados biológicos?
Os estudos funcionais investigam como as vesículas extracelulares interagem com células receptoras e influenciam processos biológicos, como sinalização, resposta inflamatória e comunicação intercelular.
Entretanto, proteínas solúveis, lipoproteínas e outros componentes coisolados também podem apresentar atividade biológica. Quando presentes nas preparações, esses contaminantes dificultam a identificação dos efeitos realmente associados às EVs.
Por exemplo, uma alteração observada na resposta de células tratadas com uma preparação enriquecida em EVs pode resultar da ação das vesículas, de componentes coisolados ou da combinação entre eles.
Por isso, a seleção do método de isolamento deve considerar os contaminantes relevantes para o ensaio. Controles experimentais e técnicas complementares de caracterização também são fundamentais.
Nos estudos funcionais, uma preparação adequadamente caracterizada ajuda a diferenciar os efeitos das vesículas extracelulares daqueles provocados por componentes coisolados.
Saiba mais nas diretrizes científicas MISEV2023.
Como funciona a cromatografia de exclusão por tamanho na purificação de EVs?
A cromatografia de exclusão por tamanho, conhecida como SEC (Size Exclusion Chromatography), separa partículas e moléculas de acordo com seu tamanho hidrodinâmico.
Durante a passagem por uma matriz porosa, partículas maiores tendem a percorrer caminhos mais curtos. Moléculas menores penetram nos poros, permanecendo por mais tempo no interior da coluna.
Essa diferença permite separar parte das vesículas extracelulares de proteínas solúveis e componentes menores presentes nas amostras.
Quais são as vantagens e limitações da SEC para exossomos?
A SEC permite realizar separações em condições relativamente brandas, sem depender de forças intensas de sedimentação. Isso favorece sua aplicação em diferentes fluxos de pesquisa com EVs.
Entretanto, a técnica apresenta limitações quando partículas não vesiculares possuem tamanhos semelhantes aos das vesículas.
Por exemplo, algumas lipoproteínas presentes no plasma podem acompanhar as frações enriquecidas em EVs. Nesses casos, métodos complementares de remoção de contaminantes podem ser necessários.
A SEC é uma ferramenta importante para purificação de EVs, mas sua eficiência depende da composição da amostra e dos contaminantes que precisam ser removidos.
Como reduzir lipoproteínas do plasma antes do isolamento de EVs?
A presença de lipoproteínas representa um desafio específico para pesquisas com vesículas extracelulares circulantes.
Uma estratégia consiste em combinar a remoção seletiva de determinadas classes de lipoproteínas com a purificação posterior por cromatografia de exclusão por tamanho.
Vesi-Omics: depleção seletiva de lipoproteínas ApoB+
O Vesi-Omics, da Vesiculab, foi desenvolvido para reduzir lipoproteínas ApoB+ presentes no plasma antes do processamento por SEC.
O fluxo apresentado pela fabricante combina duas etapas:
- Depleção: tratamento da amostra para reduzir lipoproteínas ApoB+.
- Purificação: processamento posterior por SEC para separar EVs de componentes menores e proteínas solúveis.
Essa abordagem é relevante para estudos em que a contaminação por lipoproteínas pode interferir na análise molecular das preparações, especialmente em aplicações proteômicas.
É importante considerar que a remoção de partículas ApoB+ não representa a eliminação de todas as classes de lipoproteínas presentes no plasma.
A combinação entre depleção de lipoproteínas e SEC pode contribuir para preparações de EVs mais adequadas às análises de proteínas e outros componentes moleculares.
Conheça a proposta técnica do Vesi-Omics no site da Vesiculab.
Soluções Vesiculab para isolamento e purificação de vesículas extracelulares
A escolha dos produtos para isolamento de EVs depende do volume disponível, da origem da amostra e da técnica de caracterização utilizada.
A Vesiculab oferece soluções que podem atuar em diferentes etapas do fluxo experimental, incluindo isolamento por SEC, limpeza pós-marcação, preservação e controle analítico.
Na Dafratec, pesquisadores encontram produtos da linha Vesiculab destinados à preparação e ao estudo de vesículas extracelulares e exossomos.
O fluxo de trabalho pode ser organizado conforme a necessidade: isolar, purificar, marcar, caracterizar e preservar as vesículas extracelulares.
Vesi-SEC Midi: isolamento de vesículas extracelulares em amostras de 0,5 a 1 mL
O Vesi-SEC Midi é uma coluna de cromatografia de exclusão por tamanho em formato de centrifugação, desenvolvida para o isolamento de vesículas extracelulares e vírus.
O produto processa amostras de 0,5 a 1 mL, permitindo recuperar o material em uma única coleta, sem a necessidade de reunir diferentes frações.
Esse formato é interessante para laboratórios que buscam simplificar o isolamento por SEC e preparar amostras para caracterização posterior.
Entre as aplicações potenciais estão pesquisas com EVs em biofluidos e sobrenadantes de cultura celular, conforme a compatibilidade do protocolo.
O Vesi-SEC Midi simplifica o processamento por SEC em amostras de até 1 mL, com recuperação por centrifugação e sem coleta de múltiplas frações.
Conheça o Vesi-SEC Midi na DafratecVesi-SEC Micro: purificação de EVs e remoção de corantes livres
O Vesi-SEC Micro é uma coluna SEC de centrifugação desenvolvida para purificação de vesículas extracelulares em amostras de 50 a 100 µL.
Uma de suas aplicações é a remoção de corantes e anticorpos livres após procedimentos de marcação fluorescente.
Esses reagentes residuais podem aumentar o sinal de fundo e dificultar a interpretação de análises realizadas por nano-citometria, NTA fluorescente e microscopia.
O formato Micro permite adicionar uma etapa de limpeza ao protocolo sem exigir grandes volumes de amostra.
O Vesi-SEC Micro é especialmente útil quando a amostra é limitada e a remoção de reagentes livres é importante para a qualidade da análise fluorescente.
Conheça o Vesi-SEC Micro na DafratecComo funciona a marcação fluorescente de vesículas extracelulares?
A marcação fluorescente permite investigar vesículas extracelulares em experimentos que utilizam sistemas de excitação e detecção óptica.
Essa abordagem é aplicada em estudos de caracterização, interação celular e rastreamento de partículas biológicas.
Entretanto, a escolha do corante e a remoção de reagentes não ligados são importantes para evitar interpretações equivocadas.
Vesi-Dye LMB: corantes fluorescentes para membranas lipídicas
O Vesi-Dye LMB é uma linha de sondas fluorescentes lipofílicas para marcação de partículas que apresentam membranas lipídicas.
Entre os materiais que podem ser marcados estão vesículas extracelulares, exossomos, lipossomas, vírus envelopados e nanopartículas lipídicas (LNPs).
A marcação permite utilizar técnicas como NTA fluorescente, citometria de fluxo e microscopia para investigar partículas marcadas.
Após a incubação, uma etapa de purificação com Vesi-SEC Micro pode ajudar a remover corantes livres antes da análise.
É importante considerar que corantes lipofílicos não identificam exclusivamente vesículas extracelulares. Outros materiais contendo lipídios também podem ser marcados.
A combinação entre Vesi-Dye LMB e Vesi-SEC Micro permite integrar marcação fluorescente e remoção de corante livre em um mesmo fluxo experimental.
Conheça o Vesi-Dye LMB na DafratecComo utilizar materiais de referência na caracterização de EVs?
A comparação entre diferentes experimentos e técnicas exige controles adequados. Isso é especialmente importante quando as análises envolvem partículas pequenas e sinais fluorescentes de baixa intensidade.
Materiais de referência ajudam a avaliar o desempenho do sistema de detecção, estabelecer controles e acompanhar a reprodutibilidade dos ensaios.
Vesi-Ref CD63-mNG: controle fluorescente para vesículas extracelulares
O Vesi-Ref CD63-mNG é um material de referência fluorescente destinado a estudos com vesículas extracelulares.
Sua utilização pode apoiar a otimização de protocolos, a avaliação de sensibilidade e a comparação de resultados entre métodos analíticos.
O produto é relevante em fluxos que utilizam citometria de fluxo, microscopia e outras técnicas de detecção fluorescente, respeitando as características de cada instrumento.
O uso de controles contribui para identificar limitações experimentais e diferenciar sinais associados ao material de referência de interferências analíticas.
Materiais de referência fluorescentes ajudam a verificar o desempenho dos ensaios e a melhorar a comparabilidade de resultados na caracterização de EVs.
Conheça o Vesi-Ref CD63-mNG na DafratecComo preservar vesículas extracelulares após o isolamento?
O armazenamento é uma etapa que pode influenciar a qualidade das preparações de EVs.
Durante o manuseio, as partículas podem sofrer perdas por adesão às superfícies dos recipientes. Dependendo das condições, também podem ocorrer alterações relacionadas à agregação e à estabilidade da amostra.
Esses problemas merecem atenção em estudos com pequenos volumes, baixas concentrações ou análises realizadas em momentos diferentes.
Vesi-Safe: tampão para preservação e armazenamento de EVs
O Vesi-Safe é um tampão desenvolvido para auxiliar na preservação de vesículas extracelulares durante o armazenamento e o manuseio.
Sua aplicação busca contribuir para a estabilidade, integridade e recuperação das EVs, reduzindo problemas associados ao preparo e à conservação das amostras.
O produto pode integrar fluxos experimentais que envolvem isolamento, caracterização e armazenamento, conforme os requisitos da aplicação posterior.
A seleção das condições de conservação deve considerar a origem da amostra, o período de armazenamento e os parâmetros que serão avaliados.
A preservação adequada das EVs é parte importante do controle experimental, principalmente quando as amostras serão armazenadas ou analisadas em diferentes momentos.
Conheça o Vesi-Safe na DafratecComo integrar isolamento, marcação e caracterização de vesículas extracelulares?
Um fluxo de pesquisa com EVs pode envolver diferentes etapas, dependendo do tipo de amostra e dos objetivos experimentais.
Em estudos com plasma, por exemplo, a redução de lipoproteínas pode ser importante antes da purificação por SEC. Já em pesquisas com fluorescência, a remoção de reagentes livres e a utilização de controles merecem atenção especial.
Um fluxo ilustrativo pode incluir:
- Preparo: tratamento inicial do biofluido e remoção de contaminantes selecionados, quando necessário.
- Isolamento: separação de EVs por cromatografia de exclusão por tamanho.
- Marcação: utilização de sondas ou anticorpos, conforme a técnica analítica.
- Limpeza: remoção de reagentes livres após a marcação.
- Caracterização: avaliação de partículas por métodos complementares e controles.
- Preservação: armazenamento em condições compatíveis com as análises posteriores.
Nem todos os experimentos exigem essas seis etapas. A combinação deve ser definida conforme os contaminantes relevantes, o volume disponível e as características da análise.
O fluxo ideal de isolamento de vesículas extracelulares não é universal: ele deve ser definido a partir da amostra e da pergunta científica que o estudo pretende responder.
Isolamento de EVs em larga escala: o que muda com o formato de 96 poços?
Laboratórios que processam grandes quantidades de amostras enfrentam desafios relacionados à padronização, ao tempo de execução e à manipulação individual de materiais.
Essas dificuldades são particularmente relevantes em estudos clínicos, pesquisas com coortes e experimentos que comparam diferentes condições biológicas.
Durante o webinário de 28 de outubro, a Vesiculab apresentará um novo formato de 96 poços, desenvolvido para permitir o processamento paralelo de até 96 amostras.
A proposta amplia as possibilidades de organização de fluxos de isolamento de vesículas extracelulares, especialmente em pesquisas que envolvem séries maiores de amostras.
O desempenho em relação à recuperação, pureza e reprodutibilidade deverá ser avaliado conforme os dados técnicos e as condições experimentais apresentados pela fabricante.
O novo formato de 96 poços será um dos destaques do webinário Vesiculab, com foco na ampliação da capacidade de processamento de amostras de EVs.
Quais pesquisas podem se beneficiar da purificação de vesículas extracelulares?
As técnicas de isolamento e caracterização de EVs são utilizadas em diferentes áreas da pesquisa biomédica e biotecnológica.
Entre as aplicações estão:
- Biomarcadores circulantes: investigação de componentes associados a EVs presentes em plasma e outros biofluidos.
- Oncologia: estudos de comunicação celular e identificação de moléculas de interesse em vesículas extracelulares.
- Proteômica: caracterização de proteínas associadas às preparações de EVs.
- Imunologia: investigação do papel das EVs na comunicação e na modulação de respostas celulares.
- Nano-citometria: análise de partículas e marcadores com detecção óptica apropriada.
- Microscopia: avaliação de EVs marcadas em estudos de localização e interação celular.
Em todas essas aplicações, a seleção do método de isolamento deve considerar as possíveis interferências e as exigências da técnica analítica.
A qualidade da pesquisa com vesículas extracelulares depende da integração entre preparo de amostras, métodos de caracterização e controles experimentais adequados.
Conheça as soluções Vesiculab para pesquisa com EVs na Dafratec
O isolamento de vesículas extracelulares envolve mais do que a separação inicial das partículas. A redução de contaminantes, a marcação fluorescente, os controles analíticos e a preservação também podem influenciar os resultados.
A Dafratec comercializa soluções Vesiculab para diferentes etapas desses fluxos de trabalho, incluindo as linhas Vesi-SEC, Vesi-Dye, Vesi-Ref e Vesi-Safe.
O webinário de 28 de outubro representa uma oportunidade para conhecer novas estratégias de purificação por SEC, redução de lipoproteínas e processamento paralelo de amostras.
Para conhecer os produtos disponíveis, consulte a linha de purificação de EVs por SEC na Dafratec e explore as demais soluções apresentadas neste artigo.
Trabalha com vesículas extracelulares, exossomos ou biofluidos? Entre em contato com a equipe técnica da Dafratec para avaliar soluções compatíveis com seus protocolos de isolamento, purificação e caracterização.
Perguntas frequentes sobre isolamento e purificação de EVs
A cromatografia SEC remove todas as lipoproteínas do plasma?
Não. Algumas lipoproteínas apresentam faixas de tamanho semelhantes às das vesículas extracelulares. Por isso, métodos complementares de depleção podem ser necessários conforme o objetivo da pesquisa.
Qual é a diferença entre Vesi-SEC Micro e Vesi-SEC Midi?
O Vesi-SEC Micro processa amostras de 50 a 100 µL e é especialmente útil para purificação de pequenos volumes e limpeza pós-marcação. O Vesi-SEC Midi trabalha com volumes de 0,5 a 1 mL e permite isolamento por SEC em formato de centrifugação.
Por que remover corantes livres após marcar vesículas extracelulares?
Corantes não ligados podem produzir sinais de fundo que dificultam a interpretação de análises fluorescentes. A purificação pós-marcação ajuda a reduzir essas interferências.
Qual é a importância dos materiais de referência para EVs?
Materiais de referência ajudam a avaliar o desempenho analítico, estabelecer controles e comparar resultados entre experimentos e técnicas de caracterização.
É possível processar 96 amostras de vesículas extracelulares em paralelo?
A Vesiculab apresentará um novo formato de 96 poços voltado ao processamento paralelo de até 96 amostras. As condições de uso e o desempenho deverão ser avaliados conforme a documentação técnica da fabricante.
Precisa selecionar um protocolo de isolamento de EVs? Considere a origem da amostra, o volume disponível, os contaminantes e a técnica de caracterização antes de escolher os consumíveis.
