Caracterização Física de Vetores Virais Adenovirais e Lentivirais com Análise por Nanoparticle Tracking (NTA)
A terapia gênica e a produção de vacinas virais crescem rapidamente no Brasil e no mundo. Vetores adenovirais (AdV) e lentivirais (LVV) são ferramentas essenciais nesses processos. Porém, para garantir qualidade, segurança e reprodutibilidade, é fundamental conhecer não apenas a infectividade, mas também as características físicas dos vetores: tamanho das partículas e concentração absoluta.
Métodos biológicos tradicionais (plaque assay, TCID₅₀, qPCR) são indispensáveis para medir potência biológica, mas levam dias, apresentam alta variabilidade e não informam o número total de partículas físicas.
A Particle Metrix publicou uma Application Note demonstrando como o ZetaView resolve esse desafio com rapidez, precisão e reprodutibilidade.
A Dafratec, representante exclusiva da Particle Metrix no Brasil, traz agora o conteúdo completo e adaptado para o português para que você entenda como o ZetaView resolve esse desafio com rapidez, precisão e reprodutibilidade.
Neste artigo falaremos:
- O que é a técnica NTA e como funciona
- A plataforma ZetaView® e seus diferenciais
- Resultados do estudo: tamanho e concentração de AdV e LVV
- Linearidade, reprodutibilidade e faixa dinâmica
- Referências científicas e FAQ
O que é Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)
A análise por rastreamento de nanopartículas (NTA) é uma técnica óptica que rastreia o movimento browniano de partículas individuais em suspensão. A partir desse rastreamento, determina simultaneamente o tamanho hidrodinâmico (nm) e a concentração absoluta (partículas/mL), tudo em poucos minutos, sem marcadores (label-free).
Conforme validado por Kramberger et al. (2012), o NTA é adequado para quantificação total de partículas virais em comparação com ensaios de infectividade convencionais. A independência de cultura celular torna a técnica especialmente útil para monitoramento em tempo real durante produção upstream, purificação downstream e estudos de estabilidade.
A Plataforma ZetaView para Caracterização de Vetores Virais
O sistema ZetaView Evolution quatt (laser 488 nm) realiza medições automatizadas com câmera de alta sensibilidade. O software integrado calcula distribuição de tamanho, concentração absoluta e variabilidade intra-ensaio de forma direta.
A faixa dinâmica ampla permite analisar preparações desde concentrações baixas até acima de 10¹² partículas/mL, bastando ajustar a diluição para a faixa ótima do instrumento. Além do modo light-scattering padrão, o ZetaView® suporta análise por fluorescência (F-NTA) para caracterização seletiva de subpopulações marcadas, conforme demonstrado por Gast et al. (2019) para detecção de adenovírus por light scattering e fluorescência combinados.
Resultados: Caracterização Física de AdV e LVV com ZetaView®
Foram analisadas duas preparações independentes de vetores adenovirais (AdV) e lentivirais (LVV) de diferentes fontes. Todas as amostras estavam opticamente límpidas, sem sinais visíveis de agregação.
Distribuição de Tamanho dos Vetores Virais
Todas as preparações apresentaram distribuição monomodal estreita, sem agregados detectáveis. Os vetores lentivirais exibiram distribuições ligeiramente mais amplas e tamanhos médios maiores do que os adenovirais, refletindo diferenças estruturais intrínsecas entre os dois sistemas de vetores.
- AdV (adenovirais): tamanho médio 103–104 nm
- LVV (lentivirais): tamanho médio 123–128 nm
Concentração Absoluta de Partículas Virais
As concentrações absolutas variaram mais de duas ordens de grandeza entre as preparações analisadas, refletindo diferenças esperadas introduzidas pelos processos de produção, purificação e formulação, e não diferenças de tamanho. Isso reforça que tamanho e concentração são parâmetros independentes quantificados simultaneamente pelo NTA.
- Menor concentração: 1,86 × 10¹⁰ partículas/mL (AdV Tipo 1)
- Maior concentração: 2,78 × 10¹² partículas/mL (LVV Tipo 1)
- Variabilidade intra-ensaio baixa em todas as preparações (n = 5)
Linearidade e Repetibilidade nas Diluições Seriais
Para avaliar a linearidade, preparações selecionadas foram analisadas em diluições seriais. As concentrações medidas escalaram linearmente com os fatores de diluição aplicados, com coeficiente de determinação R² = 0,991 — indicando ajuste excelente e ausência de subestimação ou superestimação sistemática. O tamanho médio das partículas permaneceu estável em toda a faixa de diluição testada, confirmando que a diluição não introduz viés na determinação de tamanho.
O estudo publicado pela Particle Metrix demonstra que o ZetaView® entrega caracterização física robusta, rápida e reprodutível de vetores adenovirais e lentivirais. Tamanho de partícula e concentração absoluta são determinados simultaneamente, como parâmetros independentes, complementando os ensaios biológicos tradicionais sem os substituir.
A linearidade em diluições seriais (R² = 0,991) e a baixa variabilidade intra-ensaio confirmam a adequação do NTA para workflows analíticos de rotina em ambientes regulados e GMP. Para laboratórios que trabalham com terapia gênica, produção de vetores ou pesquisa em virologia, a plataforma ZetaView® representa um complemento analítico direto e confiável.
Aplique essa tecnologia em seu laboratório
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Referências
- Bachurski D, Schuldner M, Nguyen P-H, et al. Extracellular vesicle measurements with nanoparticle tracking analysis – An accuracy and repeatability comparison between NanoSight NS300 and ZetaView. Journal of Extracellular Vesicles. 2019;8(1):1596016. doi:10.1080/20013078.2019.1596016
- Kramberger P, Ciringer M, Štrancar A, Peterka M. Evaluation of nanoparticle tracking analysis for total virus particle determination. Virology Journal. 2012;9:265. doi:10.1186/1743-422X-9-265
- Gast M, Sobek H, Mizaikoff B. Nanoparticle tracking of adenovirus by light scattering and fluorescence detection. Human Gene Therapy Methods. 2019;30(6):235–244. doi:10.1089/hgtb.2019.172
FAQ – Perguntas Frequentes sobre NTA e ZetaView® em Vetores Virais
- É o analisador de nanopartículas da Particle Metrix baseado em NTA. Mede simultaneamente tamanho hidrodinâmico e concentração absoluta de partículas em suspensão, incluindo vetores virais, em poucos minutos.
- 5 a 15 minutos por amostra, incluindo diluições e 5 repetições — contra vários dias dos métodos biológicos tradicionais.
- Não. Complementa. O NTA quantifica partículas físicas totais; os ensaios biológicos medem infectividade funcional. Ambos são necessários em fluxos completos de controle de qualidade.
- Neste estudo, AdV apresentaram tamanho médio de 103–104 nm e LVV de 123–128 nm. O ZetaView® detecta essa diferença com precisão estatística.
- Sim. Basta diluir para a faixa ótima de trabalho do instrumento. A linearidade foi confirmada com R² = 0,991 em diluições seriais.
- Sim. O ZetaView® suporta F-NTA (fluorescência) para análise seletiva de subpopulações marcadas, além do modo light-scattering padrão.
- Sim. A alta reprodutibilidade intra-ensaio e a linearidade confirmada tornam o sistema adequado para workflows analíticos em ambientes regulados.
- Entre em contato com a Dafratec, representante oficial da Particle Metrix no Brasil. Oferecemos demonstração, cotação, instalação e suporte técnico em português.
O que é o ZetaView® e para que serve?
Quanto tempo leva uma análise?
O NTA substitui o TCID₅₀ ou o plaque assay?
Qual é a diferença de tamanho entre vetores adenovirais e lentivirais?
A técnica funciona em amostras muito concentradas?
Posso analisar vetores marcados com fluorescência?
O ZetaView® é adequado para ambientes GMP?
Como adquirir o ZetaView® no Brasil?
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